К вопросу об определении цитологическим методом пола при исследовании частей трупов, извлеченных из воды (Экспериментальное исследование)

Вопрос о сроках сохранения полового хроматина в ядрах клеток различных тканей при их посмертной трансформации является спорным. Недостаточно изучена и качественная сторона цитологического метода, т.е. не выяснена роль отдельных структурных элементов ядра для определения пола, а поэтому, видимо, до настоящего времени не выработан и количественный критерий, на основании которого можно делать заключение о поле по хроматинсодержащим ядрам. В силу этих причин, естественно, до сих пор нет единого мнения о возможности применения цитологического метода определения пола в судебномедицинской практике.

Целью настоящего исследования явилось изучение процесса распада нормальной структуры ядер эпидермиса и клеток суставных хрящей в количественном и качественном отношении, выяснение значения глыбок хроматина различной локализации в установлении пола по тканям из частей трупов, находившихся в воде.

Материал и методика. При вскрытиях трупов мужчин и женщин с давностью смерти до 3 суток отчленяли пальцы стоп, помещали в банки с водой при температуре 8—10° Для цитологического исследования эпидермиса кожи пальцев и суставных хрящей брали пробы. Так, во время секции (контроль) взято 20 проб от трупов 6 мужчин и 4 женщин, после 4 суток пребывания в воде — 14 проб от трупов 4 мужчин и 3 женщин, после 8 суток пребывания в воде — 16 проб от трупов 4 мужчин и 4 женщин (в том числе объекты, находившиеся в воде при температуре 20°), после 17 суток пребывания в воде — 6 проб от трупов 1 мужчины и 1 женщины. Кусочки тканей фиксировали в жидкости Давидсона, заливали в парафин. Срезы толщиной 5—6 мк окрашивали по Фельгену с докраской светло-зеленым. Препараты изучали под микроскопом при увеличении 1350. В каждой пробе изучали топографию глыбок хроматина, подсчитывали 100—200 клеток для установления процентного содержания ядер с глыбками хроматина, лежащими около ядерной мембраны (половой хроматин), и глыбками хроматина, прилегающими к ядрышку (околоядрышковый хроматин).

Сравнительные данные о количестве ядер с половым и околоядрышковым хроматином в эпидермисе и хрящах трупов мужчин и женщин

Параллельные исследования эпидермиса кожи пальцев и хрящей межфаланговых суставов показывают, что в контрольном материале ядра имеют следующую морфологическую картину. В слое шиповатых клеток эпидермиса и в хряще преобладают светлые крупные ядра, общий хроматин мелкозернистый. Более крупные глыбки хроматина встречаются у мембраны ядер (половой хроматин) и у ядрышка (околоядрышковый хроматин). В ядрах клеток эпидермиса трупов мужчин и женщин глыбки околоядрышкового хроматина разнообразны по величине, форме и количеству телец, прилегающих к ядрышку. В некоторых ядрах встречается одно сферическое тельце, равное по величине ядрышку; иногда одиночное тельце примыкает к одному из полюсов ядрышка в виде шапочки или 2 сферических тельца лежат на противоположных полюсах ядрышка, в некоторых случаях у ядрышка лежит по 3—4 мелких хроматиновых тельца. По нашим подсчетам, ядра с наличием околоядрышкового хроматина в клетках эпидермиса трупов содержатся почти в равных количествах у трупов обоих полов (см. таблицу).

Ядра клеток хрящевой ткани более крупные и светлые по сравнению с ядрами клеток эпидермиса. Околоядрышковый хроматин в ядрах клеток хряща представлен мелкими интенсивно окрашенными округлыми тельцами, число которых колеблется от одного до нескольких. В клетках хрящевой ткани ядер с околоядрышковый хроматином меньше, чем в клетках эпидермиса, почти в равном количестве они встречаются у обоих полов.

Половой хроматин как в ядрах клеток эпидермиса, так и в ядрах клеток хряща представляет одиночное интенсивно окрашенное краснофиолетовое плоско-выпуклое тельце, лежащее плоской стороной на мембране ядра; иногда это тельце имеет вид треугольника. В связи с тем что ядра в клетках хрящевой ткани крупнее, чем в клетках эпидермиса, половой хроматин в них виден более отчетливо на общем светлом фоне. Как видно из таблицы, хроматинположительные ядра в клетках хрящей трупов женщин составляют в среднем 51, 2%, тогда как в клетках эпидермиса пальцев тех же трупов обнаружен всего 21% ядер с половым хроматином. Половой хроматин в ядрах эпидермиса и хрящей, взятых от трупов мужчин, встречается в незначительном количестве ядер.

Из приведенных данных следует, что околоядрышковый хроматин не имеет половой специфичности, так как встречается в равном количестве ядер у обоих полов как в клетках эпидермиса, так и в клетках хряща ¹.

В процессе пребывания пальцев трупа в воде структура ядер нарушается. Важно отметить, что разрушение ее происходит более интенсивно в клетках эпидермиса и сравнительно медленно в клетках хрящевой ткани. Так, уже через 4 дня после пребывания пальцев в воде в препаратах кожи преобладают ядра с нарушенной структурой. Ядра в клетках базального слоя становятся, как правило, резко пикнотическими, иногда деформированными серповидными. В слое шиповатых клеток также появляются деформированные ядра, но наряду с ними имеется большое количество крупных ядер, хорошо сохранивших форму. В отдельных ядрах встречаются увеличенные ядрышки. Общий хроматин светлых ядер во всех исследованных случаях утрачивает мелкозернистое строение, приобретает гомогенизированный вид. Околоядрышковый хроматин представлен одиночными округлыми тельцами или 2 тельцами, расположенными на полюсах ядрышка. Несмотря на то что в эпидермисе сохраняются ядра с пригодной для исследования структурой, с наличием ядрышек и околоядрышкового хроматина, половая метка — половой хроматин, по-видимому, в большинстве ядер утрачивается, так что в отдельных исследованиях мы не смогли обнаружить его в клетках эпидермиса трупов женщин, за счет чего количество хро-матинположительных ядер снизилось до 6%, а количество ядер с околоядрышковым хроматином — до 14, 6%. В клетках эпидермиса пальцев трупов мужчин происходят аналогичные изменения. В ростковом слое появляются деформированные и грубоструктурные ядра, а в крупных, более светлых ядрах общий хроматин гомогенизирован. Ядра с половым хроматином при этом составляют 1, 2%, а ядра с околоядрышковым хроматином — 30, 2%, что несколько превышает данные контрольных исследований. Таким образом, уже после 4 дней пребывания пальцев трупов в воде встречаются серьезные трудности при определении пола по ядрам клеток эпидермиса, так как количество хроматинположительных ядер у трупов женщин резко снижается, а у трупов мужчин может несколько возрастать.

В то же время в клетках хрящевой ткани сохраняется много ядер со структурой, свойственной свежей ткани. Достаточно хорошо в этих клетках сохраняется и половой хроматин, вследствие чего хроматинположительные ядра в клетках хрящей трупов женщин составляют 39%. В клетках хрящей трупов мужчин количество хроматинположительных ядер несколько выше, чем в контроле, — 2,7% (максимальное уклонение 6%), но по сравнению с трупами женщин невелико.

При дальнейшем пребывании частей трупов в воде (8 дней) в структуре ядер клеток эпидермиса наступают более глубокие изменения, а именно в слое шиповатых клеток появляются крупные ядра с гомогенизированной темно окрашенной структурой, крупные грубоструктурированные ядра, сморщенные структурированные ядра, мелкие пикнотические, а также деформированные серповидные ядра. Через 17 дней пребывания пальцев в воде эпидермис слущивается, ядра в обрывках росткового слоя не обнаруживаются.

В хрящевой ткани после 8 и 17 дней пребывания пальцев трупа в воде при температуре 8—10° наряду со значительным количеством сморщенных разрушенных ядер (непригодных для диагностических целей) во всех пробах обнаружено достаточное количество относительно светлых ядер с хорошо различимой структурой, в которых встречаются ядрышки и околоядрышковый хроматин. Половой хроматин в ядрах клеток хрящей более устойчив по сравнению с ядрами клеток эпидермиса, и его удается обнаружить не только в относительно светлых, но и в некоторых деформированных и сравнительно темных гомогенизированных ядрах. В клетках хрящей трупов женщин обнаруживается до 25— 26% хроматинположительных ядер, а у мужчин — лишь 1%.

На основании проведенных исследований можно заключить, что хрящевая ткань имеет значительное преимущество для цитологического определения половой принадлежности частей трупов. Если в клетках эпидермиса при выдерживании в воде утрата половой метки наступает сравнительно быстро, то в клетках хрящевой ткани количество хроматинположительных ядер уменьшается постепенно и остается достаточно высоким даже к 17-м суткам пребывания в воде. т. е. половые различия в хрящевой ткани сохраняются достаточно отчетливо.

Это положение подтверждается опытом с помещением материала в воду комнатной температуры. Если при исследовании клеток эпидермиса на 8-й день пребывания пальцев трупа в воде комнатной температуры не обнаружено ни одного ядра, то в клетках хрящевой ткани они сохранились в достаточном для исследования количестве. Несмотря на то что большинство ядер подверглось значительной деформации, структура их в различной степени нарушилась, а многие оказались вообще непригодными для исследования, половой хроматин во многих измененных ядрах (38% хроматинположительных ядер в клетках хрящей трупа женщины) сохранился. В то же время в клетках хряща трупа мужчины при таких же изменениях ядерной структуры найдено лишь 2% хроматинположительных ядер.

Результаты наших исследований показывают, что при пребывании частей трупа в воде разрушение структуры ядра и половой метки в исследованных тканях происходит с различной скоростью. Половые различия ядер клеток эпидермиса утрачиваются в течение 4 дней пребывания в воде, тогда как в хрящевой ткани они сохранились в течение всех исследований (17 дней). Эти данные не совпадают с выводами Dixon и Torr (1956, 1959) о том, что в большинстве тканей половой хроматин сохраняется в течение одинакового времени, и, наоборот, подтверждают данные Йентцш и Фюнфгаузена (1959) о том, что в клетках хрящевой ткани половой хроматин сохраняется дольше, чем в клетках эпидермиса. Таким образом, скорость разрушения половой метки зависит как от вида ткани и ее гистологической структуры, так и от глубины расположения ткани относительно поверхности органа или его части, непосредственно соприкасающейся с водой.

Holzer и Marberger (1957) указывают, что в клетках тканей, взятых от свежих трупов, количество хроматинположительных ядер колеблется у женщин от 45 до 88%; у мужчин от 0 до 14%. Близкие результаты получил А.В. Капустин (1964): 31—77% у женщин и 0—14% у мужчин. В наших исследованиях тканей трупов, взятых на 2—3-й день после наступления смерти, обнаружен в среднем 51% хроматинположительных ядер в клетках хрящевой ткани и 21% в клетках эпидермиса трупов женщин и соответственно 0,3 и 0,4% в тканях трупов мужчин, при этом преобладают ядра с хорошо сохранившейся структурой.

В связи с уменьшением количества ядер, пригодных для цитологического исследования, и хроматинположительных ядер (под влиянием процесса гниения) возникает вопрос, какие же количественные и качественные критерии необходимы для определения пола. К сожалению, в литературе этот вопрос освещен мало. Лишь Schleyer (1957) утверждает, что для установления женского пола требуется обнаружить не менее 25% ядер с половым хроматином. Опыт проведенных исследований показывает, что к категории пригодных для исследования ядер в клетках хрящей, находившихся в воде, могут быть отнесены не только Крупные светлые ядра с правильными очертаниями (округлые или овальные), имеющие тонко диспергированный мелкозернистый общий хроматин, окрашенный в розовато-фиолетовый цвет, но и ядра с гомогенизированным общим хроматином, окрашивающимся в светло-фиолетовый цвет, или частично деформированные светлые. К числу непригодных для исследования следует отнести ядра с укрупненной темно окрашенной зернистостью общего хроматина, гомогенно окрашенные темно-фиолетовые и резко деформированные (сморщенные, серповидные, мелкие пикнотические и распадающиеся).

Таким образом, установление половой принадлежности ткани трупа, подвергшейся гнилостным изменениям, может быть осуществлено, если в исследуемом объекте сохранилось достаточное количество (100— 200) ядер, пригодных для исследования. При этом принадлежность гнилостно измененных частей трупов женскому полу по хрящам может быть достоверно установлена в случае, если число хроматинположительных ядер превышает максимум, который может встречаться в клетках хрящевой ткани трупов мужчин (по нашим данным, не более 6%). Напротив, принадлежность частей трупов мужскому полу при наличии большого количества ядер с хорошо различимой структурой (более 100—200) можно достоверно установить при выявлении весьма незначительного количества хроматинположительных ядер в клетках хряща (по нашим данным, до 6%) или при их отсутствии.

Критерием экспертной оценки количественного и процентного содержания хроматинположительных ядер в каждом случае исследования должны служить данные о характере и степени макро- и микроскопических изменений исследуемого объекта.

Выводы

1. Сравнительное изучение эпидермиса и хрящевой ткани пальцев трупов, находившихся в воде, показывает, что половые различия ядер клеток хрящевой ткани сохраняются дольше, чем в клетках эпидермиса.
2. В клетках хрящевой ткани глыбки хроматина, лежащие у мембраны ядер (долевой хроматин), в количественном отношении сохраняют половую специфичность и проявляют относительно высокую морфологическую устойчивость при нахождении частей трупа в воде.
3. Околоядрышковый хроматин как в эпидермисе, так и в хряще не обладает половой специфичностью, так как содержится в равном числе ядер у обоих полов до пребывания частей трупов в воде и в количественном отношении подвержен значительным колебаниям при нарастающих посмертных изменениях тканей.
4. При строгом учете качественного состояния структуры ядер и количества хроматинположительных ядер кариологический метод определения пола по клеткам хрящей является объективным и отвечает требованиям судебномедицинской экспертизы.

¹ В отличие от нас А.В. Капустин (1964) учитывал ядра с глыбками околоядрышкового хроматина различной величины и пришел к выводу, что наиболее крупные из них наблюдаются преимущественно у лиц женского пола.