Определение групповой принадлежности выделений и клеток организма человека реакцией преципитации

Сыворотки анти-А и анти-В, преципитирующие слюну, были изготовлены Т.В. Прозоровской путем иммунизации кроликов эритроцитами человека. Она установила, что эти сыворотки специфичны и не вступают в реакцию с белками 6 видов животных, а также с мочой, потом и слезами человека; некоторые из полученных сывороток реагируют с человеческой сывороткой. М.А. Бронникова и В.П. Сибирева пользовались указанными сыворотками для определения групповой принадлежности слюны на заклеенных конвертах и окурках папирос.

Ввиду большого теоретического и практического интереса этого вопроса (определение групповой принадлежности реакцией преципитации значительно упрощает технику и сокращает срок производства экспертиз) мы задались целью изготовить группопреципитирующие сыворотки анти-А и анти-В разными методами иммунизации и изучить их свойства в реакции с выделениями и клетками организма человека.

Иммунизировали 21 кролика 30% взвесью эритроцитов группы А и 20 кроликов такой же взвесью эритроцитов группы В. Семь кроликов, иммунизированных эритроцитами группы А, и 5 кроликов, иммунизированных эритроцитами группы В, выработали групповые преципитины. Титр и специфичность полученных 12 сывороток проверяли с некипяченой и кипяченой (в течение 30 мин. ) слюной, разведенной в 5, 10, 20, 40, 80, 160 и 320 раз. Титр наблюдали 15 мин., специфичность — 1 час. Четыре сыворотки анти-А реагировали только со слюной групп А и АВ, причем с некипяченой слюной до разведения ее 1:160—1:320 и с кипяченой — 1:20 и 1:160; 3 сыворотки оказались неспецифичными, т. е. реагировали также с некипяченой слюной групп В и 0, но в меньших ее разведениях. Сыворотки анти-В были менее специфичными и обладали более низкими титрами: из 5 сывороток только одна, имевшая титр 1:80, была специфична (не реагировала с некипяченой слюной групп А и 0). Все 5 сывороток анти-В и все 7 сывороток анти-А, реагируя с кипяченой слюной соответствующих групп, совершенно не реагировали с кипяченой слюной других групп, т. е. были специфичными. Полученные сыворотки в реакции преципитации с сывороткой человека групп А, В, 0 оказались неспецифичными: всегда образовывались осадки, причем реакция с сыворотками людей с разными группами крови была одинаковой по силе (табл. 1).

Далее мы иммунизировали кроликов слюной человека групп А и В. Свежую слюну центрифугировали, жидкую ее часть разводили вдвое и выдерживали 30 мин., в водяной бане при 56°. Из 10 кроликов, иммунизированных слюной группы А, 7 выработали групповые преципитины с титром от 1:80 до 1:320 в отношении некипяченой слюны групп А и АВ. Полученные сыворотки преципитировали некипяченую слюну групп В и 0 в меньших ее разведениях (от 1:10 до 1:160). Одна сыворотка совсем не преципитировала кипяченую слюну разноименных групп. Иммунизация слюной, приведшая в 70% случаев к выработке групповых преципитинов, не дала ни одной специфичной сыворотки в отношении некипяченой слюны, поэтому исследования, направленные на получение сывороток, преципитирующих слюну, продолжались.

Таблица 1

Результат иммунизации кроликов эритроцитами человека

По аналогии с коктореципитирующими сыворотками, полученными после иммунизации кроликов кипяченым белком (более специфичные, чем сыворотки, полученные в результате иммунизации нативным белком), иммунизировали кроликов кипяченой слюной. Слюну группы В разводили вдвое и кипятили описанным способом в течение 30 мин. Иммунизацию проводили, как указано выше. От 4 из 9 кроликов получены сыворотки с титром от 1:160 до 1:320, причем 2 сыворотки были специфичными в реакции преципитации с некипяченой слюной групп А и 0. Все 4 сыворотки не вступали в реакцию с кипяченой слюной разноименных групп (табл. 2).

Затем сыворотки, специфичные с некипяченой слюной, исследовали в реакции преципитации с вытяжками из пятен слюны, выделений из носа, спермы и женского молока, группа которых была известна. Исследовали 16 образцов пятен спермы (5 — группы А, 6 — группы В, 2 — группы АВ и 3 — группы 0), 8 образцов выделений из носа (4 — группы А, 2 — группы В и 2 группы 0), 2 образца молока женщин (групп В и АВ).

Слюну, выделения из носа, сперму и женское молоко отдельно наносили на марлю и высушивали при комнатной температуре. Образцы пятен измельчали ножницами и экстрагировали стерильным физиологическим раствором при 5—6°. Через 20—24 часа вытяжки отсасывали, центрифугировали и исследовали в реакции преципитации с группопреципитирующими сыворотками анти-А и анти-В. При добавлении сывороток анти-А к неразведенным вытяжкам из пятен групп А и АВ через 0,5—5 мин. появлялись кольца преципитатов. С вытяжками из объектов групп В реакция была отрицательной в течение часа. Сыворотки анти-В вызывали образование осадков с вытяжками из пятен слюны, выделений из носа и спермы групп В и АВ через 6—15 мин., с вытяжками из объектов групп А преципитатов не наблюдалось в течение часа. Объекты группы 0 и вытяжки из пятен женского молока групп В и АВ не реагировали с сыворотками анти-А и анти-В в пределах 1 часа (табл. 3).

Таблица 2

Результат иммунизации кроликов слюной

Таблица 3

Определение групповой принадлежности выделений человека реакцией преципитации

Все исследования по выявлению групповой принадлежности пятен разных выделений проводили с 4 сыворотками анти-А и 2 сыворотками анти-В, как со свежими пятнами, так и с пятнами давностью до 6 месяцев. Разницы в результатах исследования свежих и старых пятен не отмечено.

Полученные результаты дают основание заключить, что путем реакции преципитации с изготовленными нами группопреципитирующими сыворотками можно определять групповую принадлежность не только слюны, но и выделений из носа и спермы в пятнах, что представляет практический интерес.

Дальнейшие опыты были посвящены определению реакцией преципитации групповой принадлежности мышц и печени человека.

Исследовали мышцы от 8 трупов (2 — группы А, 4 — группы В и 2 — группы 0) и печень от 3 трупов (1 — группы А и 2 — группы В). Специфичной реакции не получили. Сыворотки или вовсе не открывали групповых антигенов, или в равной мере реагировали с экстрактами из мышц и печени других различных групп. Данный вопрос подлежит дальнейшему изучению.

Все сыворотки сохраняли титр и специфичность в течение 9 месяцев (срок наблюдения).

Три кролика, иммунизированные эритроцитами группы А, и 1 кролик, иммунизированный эритроцитами группы В, после 3-месячного отдыха подверглись ревакцинации с целью установления пригодности их для использования в качестве доноров. Все они вновь выработали преципитины, причем сыворотки 2 кроликов не потеряли своих свойств.

Выводы

1. Иммунизация кроликов эритроцитами группы А в 34% случаев стимулирует продукцию групповых преципитинов анти-А, причем 57% полученных сывороток являются специфичными. Кролики, иммунизированные эритроцитами группы В, выработали групповые преципитины анти-В в 26% случаев; только 20% сывороток были специфичными.
2. Иммунизацией слюной, прогретой при 56° в течение 30 мин., в 70% случаев получены группопреципитирующие сыворотки анти-А; все они оказались неспецифичными.
3. Кролики, иммунизированные кипяченой слюной группы В, в 40% случаев выработали преципитины анти-В; половина полученных сывороток была специфичной.
4. Сыворотки, неспецифичные с разведениями некипяченой слюны, дают специфичную реакцию с кипяченой слюной.
5. Группопреципитирующие сыворотки анти-А и анти-В сохраняли титр и специфичность в течение 9 месяцев (срок наблюдения).
6. Изготовленные сыворотки дают возможность устанавливать групповую принадлежность в пятнах слюны, спермы и выделений из носа реакцией преципитации, что намного упрощает и ускоряет производство судебномедицинских экспертиз.