Сравнительное исследование антигенов системы АВ0 в слюне, сперме и в секрете влагалища

При экспертизе вещественных доказательств по делам о половых преступлениях объектом исследования служит сперма, иногда с примесью секрета влагалища. В то же время в связи с трудностью получения образцов спермы и выделений влагалища категорию «выделительства» обвиняемых и потерпевших большей частью устанавливают путем исследования слюны. Поэтому представляет интерес сравнительное изучение антигенов упомянутых выделений.

Слюна и сперма

Литературные сведения о сравнительном изучении антигенов системы АВ0 в слюне и сперме немногочисленны и противоречивы: Putkonen; Jungwirth (1955 и 1964) не находили различий в свойствах антигенов этих выделений, a Sasaki; Friedenreich и Hartmann; Sato и Ottensooser обнаружили различную выраженность этих антигенов.

Мы исследовали слюну мужчин и сперму: 26 — группы 0,27 — группы А, 15 — группы В и 9 — группы АВ (из них 4 человека — группы 0, 3 — группы А и 2 — группы АВ являлись «слабыми выделителями»). Групповую принадлежность в 39 случаях устанавливали по крови, а в 38 — по слюне и сперме, причем в слюне «слабых выделителей» выявляли еще агглютинины.

Степень «выделительства» определяли методом задержки агглютинации. Сперму и отцентрифугированную слюну одновременно исследовали в день получения, в жидком виде в кратных разведениях — от 1:2 до 1:2048 (в отдельных случаях — до 1:8192). Применяли изосыворотки β и α, иммунные сыворотки анти-В (баранью) и анти-А (кроличью), полученные путем иммунизации животных человеческими эритроцитами (эритроцитарные сыворотки), иммунные сыворотки анти-В и анти-А, изготовленные иммунизацией кроликов слюной человека (слюнные сыворотки), иммунные сыворотки анти-0(Н) двух серий — № 25 и 28, экстракты анти-Н из семян ракитника сидячелистного и бобовника Ватерера. Экстракты анти-Н и сыворотки анти-0(Н) вводили в опыт в титре 1:16, остальные сыворотки — в титре 1:32.

Показатели степени «выделительства» выражали в ступенях задержки агглютинации (под ступенью задержки агглютинации подразумевается одно разведение слюны или спермы, полностью абсорбировавшее соответствующие агглютинины или лектины, — отсутствие агглютинации стандартных эритроцитов).

После проведения указанной реакции образцы слюны и спермы высушивали на марле при комнатной температуре. Слюну и сперму «слабых выделителей» исследовали повторно в высушенном виде методом абсорбции в количественной модификации теми же сыворотками и экстрактами, что и в реакции задержки, но в титре 1:16 при титровании в смежных разведениях. Для слюны и спермы «выделителей» методом абсорбции пользовались лишь при необнаружении эритроцитарной иммунной сывороткой анти-А антигена А или сывороткой анти-0(Н) сопутствующего антигена Н; титры сывороток и экстрактов — те же, что и в опыте задержки агглютинации (табл. 1).

Таблица 1

Слюна и сперма

Основные антигены А, В, 0
груп­па		объект иссле­дова­ния	α	анти-А эрит­ро­ци­тар­ная	анти-А слюн­ная	β	анти-В эрит­роци­тар­ная	анти-В слюн­ная
АВ	А	Слю­на	6,54	2,7	7, 64
		Спер­ма	6,58	4,5	10, 27
	В	Слю­на				9, 0	9,85	8,6
		Спер­ма				8, 27	9,31	9,6
	А	Слю­на	4,86	1,28	6, 75
		Спер­ма	5,57	3,14	9, 50
	В	Слю­на				8, 57	8,43	6,50
		Спер­ма				8, 14	8,14	7,50
			Анти-0(Н) с. 25	Анти-0(H) с. 28	Анти-Н (ра­кит­ник сидя­че­лист­ный)	Анти-Н (бо­бов­ник Вате­рера)
	0	Слю­на	1,62	3,25	3, 33	2, 62
		Спер­ма	6,92	6,50	8, 39	8, 50
Сопутствующий антиген Н
	А	Слю­на	0,58	2, 08	2,52	2,0
		Спер­ма	5,0	5, 50	9,52	9,25
	В	Слю­на	0,83	1,4	1,69
		Спер­ма	2,83	3, 8	8,46
	АВ	Слю­на	0,2	1, 1	0,85
		Спер­ма	3	4	6,85

Примечание. Цифры в таблице — средние арифметические показателей степени «выделительства», выраженных в ступенях задержки агглютинации.

Полученные данные в сочетании с результатами статистической обработки материала, доведенной до вычисления коэффициента статистической достоверности различия — 1, позволяют составить представление как о свойствах сравниваемых выделений, так и об особенностях примененных реагентов.

При исследовании антигенов системы АВ0 в слюне и сперме было отмечено, что показатели степени их «выделительства» зависят в одних случаях от свойств самих антигенов, в других — от особенностей примененных реагентов, а в третьих — от обеих указанных причин.

Так, показатели степени «выделительства» антигена В в слюне и сперме групп В и АВ независимо от примененного реагента были высокими и близкими между собой.

Выявление антигена А в слюне и сперме групп А и АВ в значительной степени связано со свойствами сывороток; наиболее эффективной,

как правило, была слюнная сыворотка анти-А. Преимущество ее по сравнению с эритроцитарной сывороткой анти-А статистически достоверно при исследовании слюны (t>8 — группа A, t=3,5 — группа АВ) и спермы (t=6,7 — группа А и t=6,2 — группа АВ), а по сравнению с изосывороткой а — лишь в опытах со спермой (t~~4,5 — группы А и АВ). Что касается слюны, то в группах А и АВ различие недостоверно, хотя в группе А есть тенденция к преимуществу слюнной сыворотки (t~~2).

Результаты сравнительного изучения слюны и спермы свидетельствуют о неодинаковом сродстве антигенов к антителам, содержащимся в разных реагентах. Так, с иммунными (эритроцитарной и слюнной) сыворотками анти-А антигены спермы были активнее, чем антигены слюны; различие статистически достоверно — t>3 с обеими сыворотками; в то же время при использовании изосыворотки а показатели степени «выделительства» антигена А могли быть несколько выше то для слюны, то для спермы (статистически достоверных различий не получено) — указанная сыворотка как бы уравнивала свойства антигенов того и другого выделения.

Антиген слюны группы 0 реагировал примерно одинаково с активной сывороткой анти-0(Н) и экстрактами анти-Н [лишь с малоактивной сывороткой анти-0(Н) получены более низкие показатели степени «выделительства» — t>4], а результаты исследования спермы с обеими сыворотками анти-0(Н) были значительно ниже, чем с экстрактами анти-Н (t = 3).

Данные сравнительного исследования не зависели от примененных реагентов — степень «выделительства» антигена по сперме всегда была много выше, чем по слюне; достоверность различия высока: с сыворотками анти-0(Н) серии № 25 t=11,8 и серии № 28 t=6,36, с экстрактами анти-Н t=13,3 (ракитник сидячелистный) и 11,03 (бобовник Ватерера).

Аналогичные данные получены в отношении антигена Н в слюне и сперме групп А, В и АВ.

В слюне и сперме «слабых выделителей» групп 0, А и АВ ни основные антигены, ни сопутствующий антиген Н в реакции задержки агглютинации не обнаружили при помощи всех использованных реагентов. В реакции абсорбции основные антигены в слюне и сперме и сопутствующий антиген Н в слюне выявляли либо достоверно, либо титр соответствующего реагента снижался недостаточно для категорических выводов. В сперме «слабых выделителей» сопутствующий антиген Н обнаружили лишь в отдельных случаях.

Наряду с изложенным отметили, что некоторые серии экстракта анти-Н из семян ракитника сидячелистного урожая различных лет обладают высокой активностью к антигену Н слюны. Отдельные образцы слюны «слабых выделителей» снижали титр экстракта на 7—9 ступеней поглощения при исходном титре экстракта 1:16 и титровании в смежных разведениях или на 2—3 ступени поглощения при титре 1:32 (в кратных разведениях). Сперма тех же людей либо не влияла на титр экстракта, либо незначительно ослабляла его. В связи с такими свойствами экстракта анти-Н категорию «выделительства» по слюне в образцах группы 0 во избежание ошибок следует устанавливать одновременно 2 реагентами — экстрактом анти-Н и сывороткой анти-0(Н). В случае принципиального различия результатов необходимо пользоваться сывороткой анти-0(Н).

Слюна и выделения влагалища

В доступной нам литературе лишь одна работа касается сравнительного изучения антигенов системы АВ0 в слюне и секрете влагалища: Г.Е. Гофман и М.Г. Жолнеровский не нашли различий в степени ослабления сывороток а, β, анти-А и анти-В тем и другим выделением.

Мы исследовали слюну и выделения влагалища 35 женщин, 13 из которых относились к группе 0, 12 — к группе А, 5 — к группе В и 4 — к группе АВ. 32 женщины были «выделителями» и 3 («представители» групп 0, А и В) — «слабыми выделителями» групповых антигенов. Групповую принадлежность в 18 случаях устанавливали по образцу жидкой крови, в 17 — по слюне.

Таблица 2

Слюна и выделения влагалища

Основные антигены А, В, 0
груп­па		объект иссле­до­вания	α	анти-А эрит­ро­цитар­ная	анти-А слюн­ная	β	анти-В эрит­роци­тар­ная	анти-В слюн­ная
АВ	А	Слю­на	5,72	5, 09	6, 00
		Выде­ления влага­лища	5,54	3,90	5,80
	В	Слю­на				5,80	6,00	6,00
		Выде­ления влага­лища				4,00	4,40	5,20
	А	Слю­на	5,25	4,00	6,00
		Выде­ления влага­лища	4,74	3,00	5,75
	В	Слю­на				5,50	6,00	6,00
		Выде­ления влага­лища				4,25	4,50	4,66
			Анти- 0(H) с. 25	Анти-Н (ра­кит­ник си­дяче­лист ный)	Анти-Н (бо­бов­ник Вате­рера)
	0	Слю­на	6,33	11,33	10,25
		Выде­ле­ния влага­лища	4,00	10,00	10,00
Сопутствующий антиген Н
	А	Слю­на	5,50	11,36	8,90
		Выде­ле­ния вла­гали­ща	0,50	11,18	8,50
	В	Слю­на	4,20	10,40	8,20
		Выде­ле­ния вла­гали­ща	1,80	11,20	10,80
	АВ	Слю­на	4,50	11,25	8,00
		Выде­ления влага­лища	0,75	10,25	8,67

Примечание. Цифры в таблице — средние арифметические показателей абсорбционной способности агглютиногенов, выраженных в ступенях поглощения.

Выделения влагалища собирали на марлевые тампоны, которые высушивали при комнатной температуре. Жидкую слюну тотчас центрифугировали, выливали на марлю и тоже высушивали. Степень «выделительства» антигенов системы АВ0 в пятнах слюны и выделений влагалища устанавливали одновременно методом абсорбции агглютининов в количественной модификации. Использовали те же реагенты, за исключением сыворотки анти-0(Н) серии № 28, и в тех же титрах, что и при исследовании образцов слюны и спермы (табл. 2).

Результаты выявления антигенов системы АВ0 в слюне и выделениях влагалища были неоднородны и зависели от различных причин, как и при исследовании слюны и спермы. Так, в группах В и АВ антиген В выделений влагалища примерно в одинаковой степени ослаблял титр всех трех сывороток (β, анти-В эритроцитарной и анти-В слюнной). Роль различных реагентов при исследовании пятен слюны не выяснена в связи с полным связыванием агглютининов указанных сывороток в титре 1:32 и 1:128.

Сравнительные опыты показали, что антиген В слюны часто имел большую абсорбционную способность, чем тот же антиген выделений влагалища. Достоверными эти различия оказались с изосывороткой β (группа В, t=3,5) и эритроцитарной сывороткой анти-В (группа В, t=3,5; группа АВ, t=5,7). В остальных случаях при статистической обработке материала различия не получили подтверждения.

Слюна и выделения влагалища групп А и АВ в наибольшей степени абсорбировали агглютинины слюнной сыворотки анти-А. Результаты исследования со слюнной и эритроцитарной сыворотками анти-А имеют статистически достоверные различия: для секрета влагалища группы A t=3,2; группы АВ — t=5,7; для слюны группы АВ — t~~3 (в отношении слюны группы А преимущества слюнной сыворотки не подтвердились). Кроме того, в опытах с выделениями влагалища обеих групп отмечены еще несколько лучшие результаты с сывороткой а по сравнению с эритроцитарной сывороткой анти-А (t>2).

При сравнении опытов со слюной и выделениями влагалища оказалось, что использование 2 реагентов — сыворотки а и слюнной анти-А — не дает значительных различий в абсорбционной способности антигена А, а применение эритроцитарной сыворотки анти-А способствовало несколько лучшему обнаружению антигена А в слюне (t~~2).

Свойства примененных реагентов наиболее отчетливо повлияли на результаты исследования объектов группы 0. Для выделений влагалища, как и для слюны, самым эффективным оказался экстракт анти-Н. С сывороткой анти-0(Н) получены значительно более низкие величины абсорбционной способности антигенов. Аналогичные данные наблюдались и при выявлении сопутствующего антигена Н в образцах групп А, В и АВ. Коэффициент достоверности различия велик — от 3 (основной антиген) до 17 (сопутствующий антиген) для слюны и от 5, 5 (основной антиген) до 20 (сопутствующий антиген) для выделений влагалища. Что касается сравнительного исследования, то показатели степени абсорбции лектина анти-Н были одинаково высокими в опытах как со слюной, так и с выделениями влагалища. Антитела сыворотки анти-0(Н) более активно взаимодействовали с антигеном слюны, чем с антигеном выделений влагалища. Различие достоверно: t>7 в группе A, t~~3 в группе В и t~~5 в группе АВ; в группе 0 отмечена лишь тенденция к такого рода различию — t~~2. В значительном числе случаев сыворотка анти-0(Н) вообще не позволяла выявить сопутствующий (а иногда и основной) антиген в выделениях влагалища.

В слюне и секрете влагалища «слабых выделителей» групп А и В основные антигены в реакции абсорбции были обнаружены при использовании сывороток в титре 1:16 и развернутом их титровании; в слюне одного «слабого выделителя» группы А выявлен и сопутствующий антиген Н; в слюне и секрете влагалища одной женщины группы 0 антиген не открыт ни сывороткой анти-0(Н), ни экстрактами анти-Н.

Представляет интерес исследование слюны и спермы гр-на В., кровь которого относилась к группе 0.

В процессе реакции задержки агглютинации установлено, что в его сперме антиген 0 не обнаруживался экстрактом анти-Н из семян ракитника и сыворотками анти-0(Н) 3 разных серий. При последовании слюны получены такие же результаты с экстрактом и сыворотками анти-0(Н) 2 серий, а сыворотка 3-й серии дала полную задержку агглютинации до разведения слюны в 32 раза. Ввиду того, что его крови была свойственна группа Le(а—b—), оставалась неизвестной категория «выделительства». В процессе повторного исследования образца слюны гр-на В. через 5 месяцев задержки агглютинации не было я, с сывороткой этой серии. Возникла мысль, не зависит ли это явление от бактериальных антигенов и антител, поскольку сыворотка анти-0(Н) изготовляется путем иммунизации коз грамотрицательными бациллами — дизентерийной вакциной. С этой целью по нашей просьбе в Контрольном институте вакцин и сывороток им. Л.А. Тарасевича произвели бактериологическое исследование первой и второй порции данного образца слюны. Оказалось, что в период первых опытов слюна содержала грамотрицательные микрококки, а через 5 месяцев — грамотрицательные микрококки и грамположительные стрептококки и стафилококки.

На основании этих результатов преждевременно делать категорические выводы, но нельзя отбросить предположение, что микрофлора слюны небезразлична в случаях применения сывороток анти-0(Н), полученных путем иммунизации животных дизентерийной вакциной.

Выводы

1. Категория «выделительства», устанавливаемая у каждого человека по 2 выделениям — слюне и сперме или слюне и секрету влагалища, всегда одна и та же, но степень «выделительства», определяемая по разным выделениям, неодинакова.

2. Показатели степени «выделительства» антигенов системы АВ0 зависят от совокупности 3 факторов: какой именно антиген подвергается исследованию — А, Вит.д.; свойств антигенов того или иного выделения; примененного реагента.

3. Антиген В выражен примерно одинаково в слюне, сперме и в секрете влагалища.

Антигены А и 0 (или Н) сильнее выражены в сперме, слабее — в слюне и в секрете влагалища, причем в последнем абсорбционная способность антигенов иногда ниже, чем в слюне. Эти различия имеют существенное значение в практике судебно-медицинского исследования вещественных доказательств.

Суждение о «выделительстве» антигенов А и 0 (или Н) в большой мере зависит от примененных реагентов: наиболее высокие показатели степени «выделительства» обеспечиваются использованием иммунных слюнных сывороток анти-А и экстракта анти-Н из семян ракитника сидячелистного. Наименее активны иммунные эритроцитарные сыворотки анти-А и сыворотки анти-0(Н) некоторых серий.

4. Большая чувствительность реакции абсорбции по сравнению с реакцией задержки агглютинации отчетливо проявилась при исследовании сопутствующего антигена Н в слюне «выделителей», основных антигенов (А и В) и сопутствующего (Н) в слюне и сперме «слабых выделителей». В последнем случае основные антигены (А и В) почти всегда, а сопутствующий (Н) — в некоторых случаях обнаруживали только методом абсорбции.

5. При использовании сыворотки анти-0(Н) одной серии и экстрактов анти-Н существенных различий в их действии со слюной выделителей всех четырех групп, а также со спермой группы 0 не усматривалось.

Иные данные получены в отношении сопутствующего антигена Н в сперме групп А, В и АВ: у «выделителей» несравненно более высокие показатели задержки агглютинации наблюдались с экстрактом анти-Н; в то же время в сперме «слабых выделителей» этот реагент почти совсем не выявлял антиген Н.

Антиген группы 0 и сопутствующий антиген Н в секрете влагалища групп А, В и АВ открывались экстрактом анти-Н примерно в той же мере, что и в слюне. Сыворотка анти-0(Н) немного хуже реагировала с секретом влагалища группы 0 и почти совсем не обнаруживала в этом материале сопутствующий антиген Н.

Все изложенное свидетельствует о том, что основной антиген в слюне группы 0 и сопутствующий антиген Н в слюне групп А, В и АВ не имеют существенных различий; в сперме и секрете влагалища, наоборот, антиген, содержащийся в группе 0, и сопутствующий антиген Н заметно отличаются друг от друга.

6. Результаты опытов, изложенные в работе, подтверждают ранее высказанное нами положение, что сочетание активных и неактивных реагентов в процессе исследования одного объекта может привести к выводу об «отклоняющемся выделительстве», тогда как в действительности оно обычно.