Диагностика коксаки-вирусной инфекции при скоропостижной смерти детей раннего возраста

Важное место в заболеваемости и смертности детей занимают вирусные инфекции, однако накопленный опыт диагностики этих инфекций все еще не нашел достаточного отражения в теории и практике судебной медицины. В настоящее время среди причин скоропостижной смерти детей раннего возраста большое значение придается поражениям миокарда в форме миокардитов и кардиомиопатий Коксаки-вирусной этиологии.

Нами было изучено 22 случая скоропостижной смерти детей обоего пола в возрасте or 0 до 2 лет. При судебно-медицинском исследовании трупов мы обнаруживали увеличение размеров и массы сердца, расширение его полостей, фиброз эндокарда, нередко находили признаки полисерозита. При гистологическом исследовании наблюдались изменения миокарда в виде очагов некроза и кардиосклероза, а в ряде случаев имела место лимфоидно-клеточная инфильтрация. Все эти изменения вызывали подозрение на патологию сердца Коксаки-вирусной этиологии.

Как правило, вирусологические и серологические методы обнаружения и выделения вируса Коксаки из секционного материала сложны и длительны. В связи с этим, мы применили прямую реакцию иммунофлюоресценции в качестве экспресс-метода для диагностики Коксаки-вирусной инфекции на секционном материале.

Готовили отпечатки со слизистой оболочки тонкого кишечника, поверхности эндокарда, разных отделов миокарда, мягких мозговых оболочек, а также цитологические препараты из суспензии кардиомиоцитов. Предварительно кусочки органов тщательно отмывали в холодном (+4, +6°С) физиологическом растворе. Ткань миокарда механически измельчали, суспензировали, полученную клеточную взвесь наносили в виде капли на предметное стекло, делали на нем мазок диаметром 1,5— 2 см. Отпечатки и цитологические препараты подсушивали на воздухе, фиксировали в охлажденном (Н-4, +6° С) 96° этиловом спирте в течение 15 минут. В качестве контроля использовали материал от трупов детей, причиной смерти которых являлись травматические повреждения или заболевания без поражений кишечника и миокарда, подвергая отпечатки аналогичной обработке.

Проводили прямую реакцию иммунофлюоресценции (ИФ). Для этого сухие диагностические поливалентные и моновалентные кроличьи сыворотки к энтеровирусам группы Коксаки А и В отечественного производства метили флюоресцеин-5 — изо-тиоцианатом (ФИТЦем) по общепринятой методике.

Контроль специфичности приготовленного коньюгата осуществляли на клеточных культурах, широко используемых в практике вирусологических исследований для энтеровирусов группы Коксаки. Фиксированные отпечатки опытного и контрольного материалов окрашивали меченой сывороткой в разведении 1 : 16 во влажной камере при комнатной температуре в течение 30—40 минут, затем препараты отмывались в нескольких порциях забуференного физраствора рН 7,2—7,4. После подсушивания препараты изучали под люминисцентным микроскопом МЛ-2. Интенсивность свечения оценивали по четырехкрестовой шкале. За нижнюю границу диагностического свечения принимали флюоресценцию на 2 + , которая превышала по яркости фон препарата.

В отпечатках и в клеточных суспензиях миокарда было установлено специфическое свечение саркоплазмы разной степени интенсивности (от ++ до ++++), которое имело диффузный или очаговый характер. В окрашенных контрольных образцах свечение отсутствовало. Нередко положительная реакция отмечалась в цитоплазме соединительнотканных клеток эндокарда и эндотелия, она была менее выраженной и по интенсивности соответствовала ++.

Во всех случаях антиген вируса Коксаки групп А и В находили в цитоплазме эпителия тонкого кишечника.

В отдельных случаях регистрировали положительную реакцию в цитоплазме клеток мягких мозговых оболочек (на ++, +++). При цитологических исследованиях в этих наблюдениях документировали сочетанное развитие миокардита и менингоэнцефалита.

Проведенные исследования позволяют сделать заключение о возможности использования прямой реакции ИФ для выявления антигенов энтеровирусов Коксаки групп А и В на судебно-медицинском секционном материале.