Обнаружение слюны в пятнах на загрязненных предметах-носителях и в следах с примесью крови

В 1959 г. нами была разработана модификация метода Мюллера (Mueller) для установления наличия слюны в пятнах по присутствию в них птиалина. Выяснено, что реакция на птиалин весьма чувствительна и является практически специфичной.

Однако оставалось неизвестным, препятствует ли положительному исходу этой реакции образование следов слюны на загрязненных предметах-носителях и на накрахмаленных тканях, а также примесь к слюне крови, что нередко может иметь место в следах на вещественных доказательствах. Разрешение этих вопросов и было целью данной работы.

Исследование пятен слюны на различных предметах-носителях

Исследование пятен слюны на различных предметах-носителях проводили в двух вариантах.

Первый вариант. Неразведенную слюну наносили на 40 различных загрязненных предметов-носителей: лоскуты хлопчатобумажной текстильной ткани разных расцветок (18), капроновые изделия — чулки (5), образцы полушерстяной (3) и плательной шерстяной материи (2), овчину (2), кожу от обуви (2), брезент, лайку, вату, прюнель, драп (по одному образцу) и на клапаны трех конвертов в области клея. На кусочки площадью 5 см² указанных предметов-носителей наливали 3 мл жидкой слюны и образовавшиеся пятна высушивали при комнатной температуре. Через 2—3 дня (по высыхании) производили исследование¹.

Минимальные навески материалов со слюной, которые обеспечивали положительный результат реакции на птиалин, были равны: 1 мг — в 12 случаях, 2 мг — в 7,3 мг — в 6,4 мг—в 4,5 мг — в 3,6 мг — в 2, 7 мг — в 2,8 мг — в 2,10 мг — в одном и 14 мг — в одном случае.

Таким образом, величина навесок пятен слюны, в которых был обнаружен птиалин, на перечисленных выше предметах-носителях была не более чем при исследовании пятен слюны на марле ².

Второй вариант. Поскольку в слюне разных людей содержится неодинаковое количество птиалина, перед проведением основных опытов была исследована слюна 50 человек с целью выяснения минимального количества слюны каждого из них, требующегося для получения положительного результата реакции на птиалин. Слюну собирали в стерильные пробирки, центрифугировали, отделяли от осадка и наносили микропипеткой на марлю и на чистую белую хлопчатобумажную материю в объемах 0,001, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,01, 0,05 мл. Образовавшиеся пятна высушивали при комнатной температуре, границы их устанавливали путем облучения ультрафиолетовыми лучами. Каждое пятно целиком вырезали, измельчали, помещали в пробирку и производили реакцию на птиалин. Для контроля параллельно исследовали участки марли и хлопчатобумажной материи, равные по площади, соответствующим пятнам слюны. Пятна имели давность 3 дня (табл. 1).

Таким образом, в подавляющем большинстве случаев (39 из 50) наличие слюны в пятнах было доказано при ее минимальном количестве — от 0,001 до 0,003 мл. Для установления присутствия в пятнах слюны 8 человек потребовались несколько большие количества (0, 004—0, 005 мл). И, наконец, только в 3 случаях для получения положительного результата реакции на птиалин оказались необходимыми еще большие количества слюны — 0, 01—0, 05 мл.

Таблица 1

Минимальный объем жидкой слюны, позволяющий получить положительный результат реакции на птиалин с пятнами слюны

Для основных опытов из предварительно исследованных 50 образцов слюны были отобраны 15: в 4 случаях для обнаружения птиалина в пятнах нужен был объем жидкой слюны 0, 001 мл, в 3 — 0,002 мл, в 2 — 0,003 мл, в одном — 0,004 мл, в 2 — 0,005 мл, в 2 — 0,01 мл и в одном — 0,5 мл. Соответственные количества слюны каждого из этих лиц наносили на 46 различных загрязненных предметов-носителей (7 образцов хлопчатобумажной текстильной ткани, 4—сатина, 2 — плательной шерстяной ткани, 3 — капрона, один — искусственной шелковой материи, один — штапеля, один — драпа, 2 — овчины, один — лайки, один — кожи, один — искусственного меха, один — ватина, один — ваты, один — дерева, 9 — металлических предметов, 2 — окурка папирос, 3 образца бумаги, один — столярного клея, один — стекла, один — резины от галоши, один — резиновой пробки, один — корковой пробки). Через 1—2 дня образовавшиеся пятна вырезали или целиком соскабливали и с этим материалом производили реакцию на птиалин обычным способом. Параллельно проводили контрольные опыты с предметами-носителями без слюны. Птиалин был выявлен во всех случаях.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, о том, что характер предметов-носителей и загрязнения их не препятствуют обнаружению слюны в пятнах путем реакции на птиалин даже при чрезвычайно малом количестве слюны (0,001 мл).

Поскольку реакция на птиалин основана на расщеплении им крахмала, особый интерес представлял вопрос о выявлении слюны в пятнах на накрахмаленных материях, так как нельзя было исключить предположения, что крахмал, содержащийся в материях, может оказывать неблагоприятное действие на исход реакции. Для разрешения этого вопроса лоскуты чистой белой хлопчатобумажной материи пропитывали раствором картофельного крахмала различной концентрации (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90%). Слюну вышеуказанных 15 человек наносили в соответствующих объемах (от 0, 001 до 0, 05 мл) на накрахмаленную таким образом материю и с вырезанными целиком пятнами через 3—4 дня производили реакцию на птиалин, сопровождая ее контрольными исследованиями ненакрахмаленной материи и материи, пропитанной раствором крахмала указанной концентрации без слюны (табл. 2).

Таблица 2

Результаты реакции на птиалин при исследовании пятен слюны на накрахмаленной материи

Выяснилось, что со слюной на накрахмаленной ткани реакция на птиалин протекает так же, как и на ненакрахмаленной материи. К объяснению этого в первую очередь следовало привлечь соображение, что крахмал, имеющийся в материи, в условиях реакции на птиалин не переходит в жидкость и не усиливает концентрацию того раствора крахмала, который входит в реакцию. Это соображение подкрепляется тем, что для растворения крахмала обычно требуется кипячение жидкости, в то время как реакция на птиалин проходит при температуре 37°. Для экспериментального подтверждения указанного предположения был произведен следующий опыт: навески по 40 мг ненакрахмаленной материи и материи, пропитанной 90% раствором крахмала, помещали (отдельно) в пробирки с небольшим количеством толуола. Через 4 часа после пребывания их в условиях комнатной температуры в пробирки добавляли по 5 мл 2% раствора картофельного крахмала в 2% растворе NaCl и оставляли на 20 часов в термостате при температуре 37°. Часть жидкости из той и другой пробирки отсасывали и разводили дистиллированной водой в геометрической прогрессии от 10 до 25 000 раз. К жидкости в каждом разведении приливали по 1 капле раствора Люголя, разведенного 1:3. Как в том, так и в другом случае посинение жидкости, свидетельствующее о наличии крахмала, произошло до разведения в 800 раз. При разведении в 1600 раз крахмал не обнаруживался. Из этого следовало, что крахмал, содержащийся в материи, действительно либо совсем не растворился, либо растворился в такой незначительной степени, которая не позволила обнаружить его реактивом Люголя.

Таким образом, даже накрахмаленные ткани не оказывают неблагоприятного воздействия на исход реакции на птиалин.

Исследование пятен слюны с примесью крови

Таблица 3

Результаты реакции на птиалин в пятнах, образованных смесью слюны и крови в жидком состоянии

Для выяснения вопроса о влиянии примеси крови на результаты установления наличия слюны в пятнах во всех опытах использовали слюну одних и тех же 10 человек, причем слюну каждого человека смешивали с его же кровью. Слюна всех этих лиц содержала птиалин в таком количестве, которое давало возможность получить положительный результат реакции на птиалин в пятнах, образованных 0, 001 мл слюны. Пятна слюны с примесью крови изготовляли на марле и высушивали при комнатной температуре. Через 3—5 дней с ними проводили реакцию на птиалин. Эксперименты осуществляли в 5 вариантах.

Первый вариант. Слюну каждого из 10 человек помещали в 6 пробирок: в 1-ю из них наливали 0,001 мл, во 2-ю — 0,002 мл, в 3-ю — 0,003 мл, в 4-ю — 0,004 мл, в 5-ю — 0,005 мл, в 6-ю — 0,01 мл. В каждую пробирку добавляли 0, 1 мл крови, ингредиенты тщательно смешивали и выливали на марлю.

Примесь крови не препятствовала выявлению птиалина, но по мере уменьшения объема слюны требовалось незначительное увеличение навесок исследуемого материала (табл. 3).

Второй вариант. На 6 кусочков марли, сложенной вдвое, наносили по 0,1 мл крови, на кровь сразу же наливали жидкую слюну: на 1-й кусочек — 0,001 мл, на 2-й — 0,002 мл, на 3-й — 0,003 мл, на 4-й — 0,004 мл, на 5-й — 0,005 мл, на 6-й — 0,01 мл.

Третий вариант. Жидкую кровь наливали на влажные пятна слюны, причем соблюдали те же условия и количественные соотношения, что и во втором варианте.

Четвертый вариант. Кровь в количестве 0, 1 мл наносили на 6 кусочков марли, сложенной в два слоя, и образовавшиеся пятна высушивали при комнатной температуре. Затем на каждое пятно наносили жидкую слюну в разных объемах: на 1-е — 0,001 мл, на 2-е — 0,002 мл, на 3-е — 0,003 мл, на 4-е — 0,004 мл, на 5-е — 0,005 мл, на 6-е — 0,01 мл.

Пятый вариант. Этот вариант отличался от предыдущего лишь тем, что первоначально делали пятна слюны на марле, а затем наливали на них жидкую кровь.

Во всех четырех последних вариантах в основные опыты включались участки марли с тем расчетом, чтобы исследованию подверглась вся добавленная слюна. Границы пятен слюны перед нанесением крови отмечали (обшивали), пользуясь результатами флуоресценции в ультрафиолетовых лучах. В случае нанесения слюны на пятна крови обозначали (тоже обшивали) пределы распространения слюны по смачиванию пятна и изменению его цвета (потемнению).

Во всех случаях смешивание слюны с кровью не препятствовало обнаружению птиалина.

Поскольку для экспериментов в указанных вариантах использовалась слюна, в которой имелось большое количество птиалина, производились дополнительные исследования со слюной других 10 человек, содержащей различные количества птиалина. Для выявления птиалина в пятнах слюны одного из них (по ранее установленным данным) требовался минимальный объем слюны 0, 001 мл, для обнаружения птиалина в пятнах слюны 4 человек — 0,002 мл, одного — 0,003 мл, 2 — 0,005 мл и 2 — 0,01 мл. На влажные пятна, образованные слюной: в указанном количестве, наносили 0, 1 мл крови.

Реакция на птиалин везде была положительной.

Исследование пятен слюны, смешанной с кровью, всегда сопровождалось контрольными опытами с пятнами крови без примеси слюны, причем ни разу не был получен положительный результат реакции на птиалин.

Выводы

1. Образование следов слюны на различных загрязненных предметах-носителях и накрахмаленных тканях не препятствует доказательству наличия слюны в пятнах при помощи реакции на птиалин в примененной нами модификации, даже если на те или иные предметы слюна попала в чрезвычайно малом количестве (в нашем материале 0, 001 мл).
2. Примесь крови, даже при условии чрезвычайно малого количества слюны — 0,001 мл и значительно большего количества крови — 0,1 мл, не оказывает неблагоприятного воздействия на исход реакции на птиалин.

¹ Л.О. Барсегянц. Судебномедицинская экспертиза, 1960, т. 3, № 4, стр. 26—30.

² Л.О. Барсегянц. Судебномедицинская экспертиза, 1960, т. 3, № 4, стр. 26—30.