Морфологические изменения в слизистой оболочке желудка при геморрагической лихорадке с почечным синдромом, процессы регенерации и их связь со свободным радикальным окислением

Ведущим звеном при геморрагической лихорадке с почечным синдромом (ГЛПС) является генерализованное поражение микрососудов органов и систем [3, 4, 5, 6]. Морфологическое изучение механизмов повреждения слизистой оболочки желудка (СОЖ) при ГЛПС, процессов регенерации, их связи со свободнорадикальным окислением до настоящего времени не проводилось.

Целью настоящей работы явилась оценка взаимосвязи морфологических изменений, процессов пролиферации в СОЖ при ГЛПС и показателями свободно-радикального окисления.

Материалы и методы

Гастробиоптаты 10 больных с ГЛПС, полученные в сроки от 6 до 21 суток от начала клинической манифестации ГЛПС по поводу расстройств с гастродуоденальной симптоматикой. В группе сравнения были 10 больных с острыми гломерулонефритами без эрозивно-язвенного поражения СОЖ.

Биоптаты фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Серийные срезы окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином, нейтральные мукополисахариды выявляли PAS-реакцией.

Для оценки пролиферативных процессов в эпителии в теле и антральном отделе СОЖ использовали иммуногистохимическое исследование парафиновых срезов, которые обрабатывали с помощью моноклональных антител к антигену Ki-67 (DAKO) стрептовидин-биотиновым методом с последующей визуализацией.

В серийных срезах ядра с экспрессией подсчитывали после просмотра 1000 ядер клеток в поверхности плоскости сечения эпителиального пласта СОЖ. Индекс пролиферации выражали в процентах [1].

Оценку биогенеза свободных радикалов в гомогенизированных биоптатах слизистой оболочки желудка осуществляли методом хемилюминесценции (ХМЛ). ХМЛ регистрировали на люминесцентном спектрометре LS 50B “PERKIN ELMER”. Алгоритм ХМЛ-исследования свободнорадикального статуса включал определение следующих параметров интенсивности спонтанного и активированного свечения биосубстрата [2]: Ssp – светосумма за 1 минуту спонтанной ХМЛ, величина которой прямо коррелирует с интенсивностью процессинга свободных радикалов; h – максимум амплитуды быстрой вспышки Fe2+-индуцированного свечения, свидетельствующий о содержании гидроперекисей липидов; Sind-1 – светосумма за 2 минуты Fe2+-индуцированной ХМЛ, отражающая скорость образования перекисных радикалов преимущественно липидной природы; Slum – светосумма за 1 минуту люминол-зависимой ХМЛ, свидетельствующая об интенсивности продукции гидроксил-радикала; Н – максимум амплитуды Н2О2 –индуцированного люминол-зависимого свечения, величина которого обратно коррелирует с перекисной резистентностью субстрата; Sind-2 – светосумму за 2 минуты Н2О2–индуцированной люминолзависимой ХМЛ, величина которой обратно коррелирует с активностью антиоксидантной антирадикальной системы защиты. Интенсивность ХМЛ, измеренную в милливольтах, рассчитывали на 1 г влажной ткани и выражали в относительных единицах.

Статистическая обработка материала осуществлялась с использованием статистического пакета «Statistica v.6.0». Нормальность распределения в ыборки оценивалась по критерию Колмогорова–Смирнова, Шапиро–Уилка, Лиллиефорса. В зависимости от вида распределения показатели представлены в виде средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (m), стандартного отклонения (SD), медианы, минимума-максимума, интерквартильного размаха (25–75 %). Достоверность различий между величинами определялась с помощью t-критерия Стьюдента при нормальном распределении признака, при распределении признака, отличного от нормального – с помощью непараметрического метода Манна–Уитни. Для установления взаимосвязи признаков проводили корреляционный анализ по Пирсону (Pearson) при нормальном распределении признака или по Спирмену ( Spearman R) при распределении признака, отличного от нормального. Различия считались достоверными при р ≤ 0,05.

Результаты исследования

На нашем материале у больных ГЛПС в разгар заболевания при гастроскопии в области тела и антрального отдела желудка выявлялось утолщение слизистой оболочки за счет гиперемии и отека. Местами складки рельефные с мелкоточечными кровоизлияниями, острыми эрозиями и язвами. При св етовой микроскопии изменения в желудке носили диффузный характер, захватывали поверхностные и глубокие слои. Преобладали дистрофические изменения и некрозы преимущественно поверхностных эпителиальных структур, очаговые кровоизлияния в строму. Эпителий желудочных валиков и ямочный эпителий представлен высокими цилиндрическими клетками с пикнотическими ядрами, располагающимися в базальной части. В поверхностно-ямочном эпителии найдены признаки гиперсекреции: значительный слой ШИК-позитивного муцина, который располагался на поверхности клеток. В собственном слое слизистой оболочки желудка выявлялись отек стромы, гиперемия и стазы в микроциркуляторном русле, очаговые кровоизли яния, полиморфно-клеточная инфильтрация.

Микроскопическое исследование: дно эрозий покрыто слизью и фибрином, инфильтрировано ПМЯЛ. Кроме того, выявляется гиперемия сосудов, стазы, сладжи эритроцитов с микротромбами в микрососудах стромы.

Острые язвы выглядят как овальные дефекты слизистой оболочки, дно их серовато-красное, в отдельных язвах видны аррозированные сосуды. При гистологическом исследовании дно язв представляло собой некротические массы, пропитанные фибрином и инфильтрированные полиморфно-ядерными нейтрофилами. Под некротическими массами обнаруживались зоны фибриноидного некроза, грануляционной ткани.

Отмечены выраженные дистрофические и некротические изменения клеток СОЖ в сочетании с признаками очаговой гиперплазии покровно-ямочного эпителия и началом переключения дифференцировки эпителиальных клеток в сторону мукоцитов на фоне усиленной пролиферации эпителия в сочетании с ослаблением дифференцировки более высокоспециализированных клеток (главных и обкладочных).

При анализе показателей индекса пролиферации KI-67 в теле и антральном отделах СОЖ отмечено статистически значимое увеличение показателей пролиферации (табл. 1).

Таблица 1

Изменения индекса пролиферации Ki-67 в слизистой оболочке желудка

Примечание: достоверность различий между группами * Р < 0,000000

Анализ показателей ХМЛ гомогенизированных гастробиоптатов больных с ГЛПС в теле и антральном отделе СОЖ показал статистически значимые отрицательные связи между уровнями генерации свободных радикалов и индексом пролиферации Ki-67 (табл. 2, 3).

Таблица 2

Результаты корреляционного анализа между показателями индекса пролиферации Ki-67 и хемилюминесценции (усл. ед.) в ткани СОЖ при ГЛПС (тело)

Таблица 3

Результаты корреляционного анализа между показателями индекса пролиферации Ki-67 и хемилюминесценции (усл. ед.) в ткани СОЖ при ГЛПС (антральный отдел)

Таким образом, исследование гастробиоптатов при ГЛПС в разгар з аболевания выявило статистически значимое увеличение индекса пролифер ации Ki67 в СОЖ в теле и антральном отделе при ГЛПС. Также отмечена отрицательная связь между индексом пролиферации Ki67 и показателями свободно-радикального окисления (Ssp), которые объективно отражают степень структурных изменений и перестройку в СОЖ при данном вирусном повреждении.

Список литературы:

1. Автандилов, Г. Г. Введение в количественную патологическую морфологию / Г. Г. Автандилов. – М.: Медицина, 1980. – 216 с.
2. Арутюнян, А. В. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма: методические рекомендации / А. В. Арутюнян, Е. Е. Дубинина, Н. Н. Зыбина. – СПб, 2000. – 198 c.
3. Евсеев, А. Н. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом. Пато и морфогенез, макро и микроскопическое исследование: моногр. / А. Н. Евсеев. – Хабаровск: ООО «Омега Пресс», 2010. – 296 с.
4. Евсеев, А. Н. Морфологические изменения в почках при ГЛПС / А. Н. Евсеев // Актуальные вопросы патологической анатомии: материалы Дальневост. науч.-практ. конф., Владивосток, 25–27 мая 2011 г. / под ред. Ю. В. Каминского. – Владивосток: Медицина ДВ, 2011. – С. 119–121.
5. Пат. № 2245104. Способ прогнозирования возникновения эрозивноязвенных поражений желудка при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Евсеев А. Н., Тимошин С. С. ; опубл. 27.01.05.
6. Сиротин, Б. З. Очерки изучения геморрагической лихорадки с почечным синдромом: монография / Б. З. Сиротин – Хабаровск: РИОТИП, 2005. – 194 с.